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1 符合率试验
PCV2 ELISA与间接免疫荧光检测方法(IIF)的比较
由上表结果显示ELISA方法阳性检出率为63.3% ,阴性检出率为36.7%；而用猪2型圆环病毒间接免疫荧光试验阳性检出率为59.2%,阴性检出率为40.8%。其中两种方法检测阳性符合率为 90.3%,阴性符合率为94.4%，总符合率为91.8% 。表明ELISA在测定抗体效价时较为敏感。
注：间接免疫荧光检测方法(IIF)是实验室检测圆环病毒经典方法。
PCV2 ELISA与荷兰塞迪的捕获ELISA试剂盒（商品化）的比较
用PCV2 ELISA试剂盒检测117份猪血清，结果阳性率为72.65% ，阴性率为28.35%。对比国外试剂盒检测结果，阳性率为70.94%，阴性率为29.06%。阳性符合率为64.96%，阴性复核率为21.37%，总符合率为86.32%。
注；荷兰塞迪的捕获ELISA试剂盒（商品化）在国内使用的比较少，其效果还有待验证。
猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒
使用说明书
【简介】
试剂盒由抗原包被的微孔板，酶标羊抗猪IgG及其它试剂制成，应用间接ELISA原理检测猪血清中抗Ⅱ型圆环病毒ORF2蛋白的抗体。
【用途】
猪圆环病毒2型ELISA抗体检测诊断试剂盒用于检测猪血清中抗Ⅱ型圆环病毒ORF2蛋白的抗体。评估猪场圆环病疫苗免疫状况。感染猪的血清学诊断。
【原理】
本 试剂盒是采用猪圆环病毒2型ORF2基因的工程表达产物包被微孔板，在试验中，加入稀释的对照血清和待检血清，经温育后，若样品中含有抗猪圆环病毒2型 ORF2蛋白特异性抗体，则将与检测板上抗原结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后；再加入酶标二抗，与检测板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经 洗涤除去未结合的酶结合物，在孔中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，加入HF溶液终止反应后，用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD值。
【试剂盒主要成分】
1 包被抗原的微孔板 2块 （96孔/块）
2 阴、阳性对照血清 各1管 （1ml/管）
3 羊抗猪酶标二抗 1瓶 （30ml/瓶）
4 20倍浓缩洗涤液 1瓶 （50ml/瓶）
5 底物A液、B液 各1瓶 （10ml/瓶）
6 终止液 1瓶 （10ml/瓶）
7 样品稀释液 1瓶 （50ml/瓶）
8 血清稀释板 2块 （96孔/板）
9 说明书 1张
【样品制备】
取动物全血，按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血。
【洗涤液配制】
使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（25℃左右），并摇动使沉淀的盐溶解（最好在37℃水中加热5-10min），然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释（例如：每板用20 ml浓缩液加上380ml水），稀释好的洗涤液在4℃可以存放7天。
【样品稀释】
在血清稀释板中按1：40的体积稀释待检血清（195μl样品稀释液中加5μl待检血清）。
注意：阳性和阴性对照1：4稀释，（180μl样品稀释液中加60μl对照血清，吹打均匀）。
【注意事项】
1 试剂盒使用前各试剂应平衡至室温，使用后放回2-8℃。
2 不同批号试剂盒的试剂组分不得混用，使用试剂时应防止试剂污染。
3 不要用口移液。
4 TMB（底物液B）不要暴露于强光，避免接触氧化剂。
5 检测板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中，应尽快置于2-8℃)。
6 待检血清样品数量较多时，应先使用血清稀释板稀释完所有要检测血清，再将稀释好的血清转移到检测板，使反应时间一致。
7 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水稀释，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。
8 严格按照操作说明书可以获得最好的结果，操作过程中移液，定时和洗涤等的全过程必须精确。
【操作步骤】
1 取检测板（根据样品多少可拆开分次使用），用稀释好的洗涤液洗板2次（200µl/孔）每次静置2分钟后倒掉，再在干净吸水纸上拍干。
2 取稀释好的待检样品100μl加入到检测板中；阴性对照和阳性对照各设2孔，每孔100μl；轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30分钟。
3 甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板3次，200μl/孔，每次静置3分钟倒掉，再在干净吸水纸上拍干。
4 每孔加羊抗猪酶标二抗100μl，置37℃温育30分钟。
5 洗涤5次, 方法同3。切记每次在干净吸水纸上拍干。
6 每孔先加底物液A一滴（50µl）、再加底物液B一滴（50µl），混匀，室温(18℃-25℃)避光显色10分钟。
7 每孔加终止液1滴(50μl)，10分钟内测定结果（检测前在震荡器上轻轻震动一下）。
【结果判定】 在酶标仪上测各孔OD630值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630值大于或等于1.0，阴性对照孔平均OD630值必须小于0.3。
样品OD630值大于0.42，判为阳性；样品OD630值在0.38到0.42之间，判为可疑；样品OD630值小于0.38，判为阴性。
注意：用620 ~650纳米波长测定结果均有效。
【贮 存】2-8℃避光保存
【有 效 期】6个月
【联系方式】地 址：华中农业大学动物医学院动物病毒室
武汉科前动物生物制品有限责任公司 邮 编：430070
027-87283705（实验室） 027-87284425（电话与传真） 027-87284429转8000（销售）
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